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363050.com发布时间:2025-10-11 07:26:06 点击量:
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目的研究TOLL样受体4(TLR4)在脂多糖(LPS)诱导人肝内胆管上皮细胞HIBECS上皮间质转化(EMT)中的作用及核转录因子SNAIL是否与参与该过程的调控。方法体外培养人肝内胆管上皮细胞,CONLPS组加终浓度为2UG/ML的LPS诱导72H,CON组不作处理作为对照。倒置相差显微镜观察细胞形态变化;REALTIMEPCR检测上皮标记物ECADHERIN,间质标记物NCADHERIN、VIMENTIN,TLR4、核转录因子SNAILMRNA表达量;WESTERNBLOT检测以上各指标蛋白表达量;TRANSWELL细胞迁移实验评估各组细胞移动能力。KDLPS组构建TLR4SIRNA慢病毒载体,采用RNA干扰技术沉默HIBECS中TLR4,NCLPS组空白病毒转染作为对照,转染72H后分别予终浓度为2UG/ML的LPS诱导,72H后通过上述方法观察慢病毒转染对LPS诱导的细胞形态改变,TLR4、SNAIL、上皮间质标记物基因表达改变的影响。结果1LPS诱导HIBECS72H,CONLPS组细胞由上皮向间叶样细胞形态改变;与CON组相比,CONLPS组上皮标记物ECADHERINMRNA表达下调(P2CONLPS组TLR4MRNA表达量高于CON组(P3CONLPS组SNAILMRNA表达量高于CON组(P4KDLPS组TLR4SIRNA慢病毒转染HIBECS,TLR4MRNA表达量较NCLPS组降低(P5沉默HIBECS中TLR4,KDLPS组SNAILMRNA表达量较NCLPS组降低(P6沉默HIBECS中TLR4,KDLPS组细胞由上皮向间叶样细胞形态改变不明显。与NCLPS组比较,KDLPS组上皮标记物ECADHERINMRNA表达较高(P结论1LPS通过激活TLR4诱导HIBEC发生EMT;2LPS诱导HIBECS发生EMT可能受转录因子SNAIL调控。
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